ZEBRA
RU
.
FISH
in vivo Solutions for Biomedical Research
Перейти к контенту
О САЙТЕ

"ZEBRAFISH.RU" пер­вый рос­сийс­кий ин­тер­нет ре­сурс, пос­вя­щен­ный ис­поль­зо­ва­нию рыб Danio rerio (зеб­ра­фиш) в ка­чес­т­ве мо­дель­но­го ор­га­низ­ма для би­о­ме­ди­цин­с­ких ис­сле­до­ва­ний. Сайт со­дер­жит опи­са­ние ме­то­дов и под­хо­дов, ко­то­рые при­ме­ня­ют­ся при ра­бо­те с зеб­ра­фиш в ла­бо­ра­то­рии кан­це­ро­ге­не­за и ста­ре­ния На­цио­наль­но­го ме­ди­цин­ско­го ис­сле­до­ва­тельс­ко­го цент­ра  он­ко­ло­гии им. Н.Н.Пет­ро­ва Мин­зд­ра­ва Рос­сии. На­ши ис­сле­до­ва­ния сфо­ку­си­ро­ва­ны на раз­ра­бот­ке но­вых мо­де­лей опу­хо­ле­во­го рос­та c ис­поль­зо­ва­ни­ем рыб D. rerio, а так­же в об­лас­ти ин­тег­ра­ции зеб­ра­фиш в сис­те­му пред­к­ли­ни­чес­ких ис­пы­та­ний но­вых фар­ма­ко­ло­ги­чес­ких пре­па­ра­тов.

В нас­то­я­щее вре­мя в ла­бо­ра­то­рии под­дер­жи­ва­ют­ся бо­лее 60 му­тан­т­ных и тран­с­ген­ных ли­ний зеб­ра­фиш, пред­наз­на­чен­ных для вы­пол­не­ния раз­лич­ных ис­сле­до­ва­ний в об­лас­ти он­ко­ло­гии, ге­не­ти­ки, тран­сп­лан­то­ло­гии и ре­ге­не­ра­тив­ной ме­ди­ци­ны.




 Нами накоплен уникальный
опыт выполнения различных
манипуляций с эмбрионами и
взрослыми рыбами в таких
областях, как


индукция опухолей у зебрафиш химическими канцерогенами;

индукция опухолей у зебрафиш введением генетических конструкций, cодержащих онкогены;

исследование транзиторной экспрессии флуоресцентных репортеров;

создание стабильных трансгенных линий;

трансплантация нормальных и опухолевых клеток эмбрионам и взрослым рыбам;

генерация генетически измененных полиплоидных и клональных линий;

тестирование химических соединений на различные виды биологической активности (общая токсичность, канцероге нность, органоспецифическая токсичность, эмбриотоксичность, антиангиогенное действие)
ЗЕБРАФИШ
Зеб­ра­фиш - не­боль­шая ры­ба от­ря­да кар­по­об­раз­ных, се­мейст­ва кар­по­вых. Впер­вые бы­ла опи­са­на в 1822 го­ду ка­над­с­ким зо­оло­гом Ф. Га­миль­то­ном. При­род­ный аре­ал рас­п­рос­т­ра­не­ния зеб­ра­фиш ох­ва­ты­ва­ет ре­ки Ин­дии, Па­кис­та­на и Бан­г­ла­деш. Вви­ду неп­ри­хот­ли­вос­ти яв­ля­ет­ся по­пу­ляр­ным объ­ек­том для со­дер­жа­ния в  ак­ва­ри­у­мах
D. rerio, дикий тип
ПОЧЕМУ ЗЕБРАФИШ?

В пос­лед­ние де­ся­ти­ле­тия зеб­ра­фиш ста­ла од­ним из на­и­бо­лее вос­т­ре­бо­ван­ных мо­дель­ных ор­га­низ­мов, ока­зав­шись, на­ря­ду с Dro­so­phi­la, Xe­no­pus и ла­бо­ра­тор­ны­ми ли­ни­я­ми гры­зу­нов, уни­вер­саль­ным объ­ек­том для про­ве­де­ния фун­да­мен­таль­ных и прик­лад­ных ис­сле­до­ва­ний прак­ти­чес­ки во всех об­лас­тях би­о­ло­гии и ме­ди­ци­ны. Эта по­пу­ляр­ность обус­лов­ле­на та­ки­ми осо­бен­нос­тя­ми это­го ор­га­низ­ма, как

небольшие размеры (максимум 4 см);

легкость содержания и разведения в лабораторных условиях;

возможность получения большого количества эмбрионов;

высокая скорость развития (формирование органов и систем происходит в течении 48 часов);

характерный для всех позвоночных животных план строения;

полностью секвенированный геном;

наличие ортологов в геноме человека у более чем 80% генов зебрафиш

прозрачность эмбрионов и личинок, позволяющая наблюдать различные биологические
процессы in vivo;
ЛАБОРАТОРНЫЕ ЛИНИИ ЗЕБРАФИШ
tg(mylz2:GFP)
В нас­то­я­щее вре­мя ла­бо­ра­то­ри­ях соз­да­ны сот­ни му­тан­т­ных и тран­с­ген­ных ли­ний зеб­ра­фиш, ко­то­рые зна­чи­тель­но рас­ши­ря­ют сфе­ру при­ме­не­ния это­го объ­ек­та для фун­да­мен­таль­ных и прик­лад­ных ис­сле­до­ва­ний. В час­т­нос­ти, нес­коль­ко лет на­зад бы­ли соз­да­ны тран­с­па­рен­т­ные ли­нии зеб­ра­фиш, по­лу­чив­шие наз­ва­ние "sheer" и "casper", ко­то­рые поз­во­ля­ют наб­лю­дать за по­ве­де­ни­ем нор­маль­ных и опу­хо­ле­вых тка­ней, тран­сп­лан­ти­ро­ван­ных ры­бам этих ли­ний, не­ин­ва­зив­ны­ми ме­то­да­ми. Тран­с­ген­ные ли­нии tg(fli1a:EGFP) и tg(vegf:GRCFP), экс­прес­си­ру­ю­щие флу­о­рес­цен­т­ные ре­пор­те­ры в клет­ках эн­до­те­лия со­су­дов, яв­ля­ют­ся уни­каль­ны­ми ин­ст­ру­мен­та­ми для изу­че­ния опу­хо­ле­во­го ан­ги­о­ге­не­за и тес­ти­ро­ва­ния эф­фек­тив­нос­ти ан­ти­ан­ги­о­ген­ных аген­тов. Дру­гая тран­с­ген­ная ли­ния tg(cMLC2:GRCFP), эк­сп­рес­си­ру­ю­щая зе­ле­ный флу­о­рес­цен­т­ный бе­лок в кар­ди­о­ми­о­ци­тах, иде­аль­но под­хо­дит для изу­че­ния вли­я­ние раз­лич­ных хи­ми­чес­ких со­е­ди­не­ний на час­то­ту сер­деч­ных сок­ра­ще­ний. Не­боль­шие раз­ме­ры эм­б­ри­о­нов и ли­чи­нок зеб­ра­фиш, поз­во­ля­ют при­ме­нять для их куль­ти­ви­ро­ва­ния стан­дар­т­ные куль­ту­раль­ные план­ше­ты, за­пол­нен­ные сре­дой, в ко­то­рой рас­т­во­рены тес­т­ру­е­мые аген­ты. Эта осо­бен­ность да­ет воз­мож­ность ис­поль­зо­вать зеб­ра­фиш для про­ве­де­ния маш­таб­ных скри­нин­го­вых ис­сле­до­ва­ний хи­ми­чес­ких биб­ли­о­тек, сос­то­я­щих из ты­сяч низ­ко­мо­ле­ку­ляр­ных со­е­ди­не­ний.
  
В лаборатории поддерживается более 60 трансгенных и мутантных линий зебрафиш

Большинство из этих линий уникальны для России

СОДЕРЖАНИЕ В ЛАБОРАТОРИИ


В ла­бо­ра­то­ри­ях зеб­ра­фиш со­дер­жат в про­точ­но-ре­цир­ку­ля­ци­он­ных сис­те­мах, снаб­жен­ных ме­ха­ни­чес­ки­ми, хи­ми­чес­ки­ми и би­о­ло­ги­чес­ки­ми фильт­ра­ми, ус­та­нов­к­ка­ми УФ сте­ри­ли­за­ции во­ды, а та­же кон­т­рол­ле­ра­ми для ав­то­ма­ти­чес­ко­го под­дер­жа­ния тем­пе­ра­ту­ры, уров­ня во­ды и гид­ро­хи­ми­чес­ких по­ка­за­те­лей. Све­то­вой ре­жим ус­та­нав­ли­ва­ет­ся всо­от­но­ше­нии 14/10 ча­сов день/ночь. Кор­м­ле­ние про­из­во­дит­ся два раза в день су­хим кор­мом (Тет­ра­мин, Гер­ма­ния) и на­уп­ли­я­ми ар­те­мии (Artemia salina).
РУКОВОДСТВА


Под­роб­ные cве­де­ния о ра­бо­те с зеб­ра­фиш и осо­бен­нос­тях их со­дер­жа­нии в ла­бо­ра­тор­ных ус­ло­ви­ях мож­но най­ти в спе­циаль­ных ру­ко­водст­вах - "The Zeb­ra­fish Book", "Gui­dance on the Hou­zing and Care of Zeb­ra­fish" и "The La­bo­ra­to­ry Fish", а так­же в спе­ци­а­ли­зи­ро­ван­ном жур­на­ле "Zeb­ra­fish", ко­то­рый из­да­ет­ся Mary Ann Lie­bert Inc. Pub­li­shers и со­дер­жит ма­те­ри­а­лы, пос­вя­щен­ные раз­лич­ным на­уч­ным и прак­ти­чес­ким ас­пек­там ис­поль­зо­ва­ния зеб­ра­фиш в би­о­ме­ди­цин­с­ких ис­сле­до­ва­ни­ях.



     
  




     
       скачать книгу
ИССЛЕДОВАНИЯ





Наша миссия -
способствовать
расширению
исследований на
модели зебрафиш
в России







На­ши ис­сле­до­ва­ния нап­рав­ле­ны на раз­ра­бот­ку но­вых мо­де­лей опу­хо­ле­во­го рос­та у зеб­ра­фиш, а так­же на ин­тег­ра­цию рыб в сис­те­му док­ли­ни­чес­ких ис­пы­та­ний ле­кар­ст­вен­ных пре­па­ра­тов. В час­т­нос­ти мы ра­бо­та­ем над соз­да­ни­ем тех­но­ло­гии вы­со­коп­ро­из­во­ди­тель­но­го скри­нин­га тар­гет­ных пре­па­ра­тов, на­це­лен­ных на ин­ги­би­ро­ва­ние сиг­наль­но­го кас­ка­да он­ко­ге­на RAS и над ге­не­ра­ци­ей тран­с­па­рен­т­ных кло­наль­ных ли­ний зеб­ра­фиш, пред­наз­на­чен­ных для эк­с­пе­ри­мен­тов по аллотран­сп­лан­та­ции нор­маль­ных и опу­хо­ле­вых кле­ток.




УСЛУГИ

     Лаборатория
     оснащена всем
     необходимым
     оборудованием
     для успешного
     выполнения
     исследований на
     модели зебрафиш




Для про­ве­де­ния ис­сле­до­ва­ний в ла­бо­ра­то­рии име­ет­ся сов­ре­мен­ный ак­ва­ри­ум­ный ком­п­лекс, рас­счи­тан­ный на од­нов­ре­мен­ное со­дер­жа­ние око­ло 25 000 взрос­лых рыб. Обо­ру­до­ва­ние ла­бо­ра­то­рии поз­во­ля­ет вы­пол­нять прак­ти­чес­ки лю­бые ви­ды ра­бот с зеб­ра­фиш, вклю­чая мик­ро­инъ­ек­ции плаз­мид­ной ДНК, мор­фо­ли­но или хи­ми­чес­ких аген­тов в зи­го­ты или в эм­б­ри­о­ны, тран­сп­лан­та­цию эм­б­ри­о­наль­ных кле­ток (соз­да­ние хи­мер­ных ор­га­низ­мов), ви­зу­а­ли­за­цию флу­о­рес­цен­т­ных ре­пор­те­ров (GFP, dsRED, RFP, Cherry) и краси­те­лей, компь­ю­тер­ный ана­лиз по­ве­де­ния и сер­деч­но­го рит­ма. Мы пос­то­ян­но ра­бо­та­ем над соз­да­ни­ем но­вых и улуч­ше­ни­ем су­щес­т­ву­ю­щих ме­то­дов ра­бо­ты с этим объ­ек­том. В нас­то­я­щее вре­мя в ла­бо­ра­то­рии под­дер­жи­ва­ет­ся бо­лее 20 му­тан­т­ных и тран­с­ген­ных ли­ний рыб, пол­ный спи­сок ко­то­рых мож­но по­лу­чить по зап­росу. Мы го­то­вы ока­зать кон­суль­та­тив­ную по­мощь по лю­бым воп­росам свя­зан­ным с ис­поль­зо­ва­ни­ем зеб­ра­фиш для про­ве­де­ния ис­сле­до­ва­ний в раз­лич­ных об­лас­тях би­о­ло­гии и ме­ди­ци­ны, а так­же по со­дер­жа­нию рыб в ла­бо­ра­тор­ных ус­ло­ви­ях.

В настоящее время мы предлагаем выполнение
следующих видов исследований на модели зебрафиш (D. rerio) :





ИССЛЕДОВАНИЕ КАРДИОТОКСИЧНОСТИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ

Для оцен­ки сер­деч­но­го рит­ма мы ис­поль­зу­ем тран­с­ген­ную ли­нию tg(cMLC2:GRCFP) зеб­ра­фиш, ко­то­рая эк­сп­рес­си­ру­ет флу­о­рес­цен­т­ный ре­пор­тер в кар­ди­о­ми­о­ци­тах. Эк­с­пе­ри­мен­ты про­во­дят­ся на эм­б­ри­о­нах в воз­ра­те 48 ча­сов, куль­ти­ви­ру­е­мых в 24 лу­ноч­ных план­ше­тах. Каж­дая кон­цен­т­ра­ция ис­пы­ты­ва­ет­ся на 10 эм­б­ри­о­нах.

Подробнее...
ИЗУЧЕНИЕ КАНЦЕРОГЕННОСТИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ

Зеб­ра­фиш об­ла­да­ют вы­со­кой чув­ст­ви­тель­ностью к дейст­вию хи­ми­чес­ких кан­це­ро­ге­нов. Это поз­во­ля­ет ис­поль­зо­вать эту мо­дель для про­ве­де­ния тес­ти­ро­ва­ния хи­ми­чес­ких со­е­ди­не­ний, вклю­чая ле­кар­ст­вен­ные пре­па­ра­ты, на спо­соб­ность ин­ду­ци­ро­вать раз­ви­тие зло­ка­чес­т­вен­ных опу­хо­лей. Изу­че­ние кан­це­ро­ген­нос­ти на ры­бах поз­во­ля­ет сок­ра­тить в нес­коль­ко раз дли­тель­ность и сто­и­мость тес­ти­ро­ва­ния по срав­не­нию со стан­дар­т­ны­ми мо­де­ля­ми на гры­зу­нах.

Подробнее...
ИЗУЧЕНИЕ ГЕПАТОТОКСИЧНОСТИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ

Для оцен­ки ге­па­то­ток­си­чес­ко­го дейст­вия ис­поль­зу­ет­ся эм­б­ри­о­ны в воз­рас­те пя­ти дней, спо­соб­ные к де­ток­си­ка­ции ксе­но­би­о­ти­ков в тка­ни пе­че­ни. Тес­ти­ро­ва­ние про­из­во­дит­ся в 24 лу­ноч­ных план­ше­тах. В каж­дую лун­ку по­ме­ща­ют по пять эм­б­ри­о­нов и од­но­му мл рас­т­во­ра изу­ча­е­мо­го со­е­ди­не­ния. Од­на кон­цен­т­ра­ция тес­ти­ру­ет­ся на 10 ли­чин­ках.

Подробнее...
ИССЛЕДОВАНИЕ АНТИАНГИОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ

У эм­б­ри­о­нов зеб­ра­фиш кро­во­об­ра­ще­ния на­чи­на­ет­ся приб­ли­зи­тель­но че­рез 20 ча­сов пос­ле оп­ло­дот­во­ре­ния. Вслед за этим на­чи­на­ет­ся ан­ги­о­ген­ный рост меж­сег­мен­т­ных кро­ве­нос­ных со­су­дов, ко­то­рые бе­рут свое про­ис­хож­де­ние от дор­заль­ной аор­ты и зад­ней кар­ди­наль­ной ве­ны. Этот про­цесс мо­жет быть лег­ко ви­зу­а­ли­зи­ро­ван при ис­поль­зо­ва­нии спе­ци­аль­ных тран­с­ген­ных ли­ний g(fli1a:EGFP) и tg(VEGFR2:AcGFP) зеб­ра­фиш, ко­то­рые эк­сп­рес­си­ру­ют флу­о­рес­цен­т­ные ре­пор­те­ры.

Подробнее...
СОЗДАНИЕ ТРАНСГЕННЫХ МОДЕЛЕЙ

Эм­б­ри­о­ны зеб­ра­фиш яв­ля­ют­ся удоб­ны­ми объ­ек­та­ми для изу­че­ния мо­за­ич­ной тран­зи­тор­ной эк­сп­рес­сии ге­не­ти­чес­ких кон­ст­рук­ций, инъ­е­ци­ро­ван­ных в зи­го­ты. Мы го­то­вы про­вес­ти тес­ти­ро­ва­ние ге­не­ти­чес­ких кон­ст­рук­ций, со­дер­жа­щих флу­о­рес­цен­т­ные ре­пор­те­ры на их спо­соб­ность к эк­сп­рес­сии в ор­га­низ­ме зеб­ра­фиш. Ана­лиз эк­сп­рес­сии тран­с­ге­на стан­дар­т­но про­из­во­дит­ся че­рез 24, 48 и 96 ча­сов.

Подробнее...
ОПРЕДЕЛEНИЕ ТОКСИЧНОСТИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ

Для оцен­ки ос­т­ро­го ток­си­чес­ко­го дейст­вия хи­ми­чес­ких со­е­ди­не­ний ис­поль­зу­ют­ся эм­б­ри­о­ны зеб­ра­фиш в воз­рас­те двух ча­сов. Тес­т­ро­ва­ния про­из­во­дит­ся в 24 лу­ноч­ных план­ше­тах. В каж­дую лун­ку по­ме­ща­ют по пять эм­б­ри­о­нов и од­но­му мл рас­т­во­ра изу­ча­е­мо­го со­е­ди­не­ния. Од­на кон­цен­т­ра­ция тес­ти­ру­ет­ся на 20 эм­б­ри­о­нах.

Подробнее...
ОЦЕНКА ПОВЕДЕНЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ

Для оцен­ки вли­я­ния хи­ми­чес­ких со­е­ди­не­ний на по­ве­де­ние зеб­ра­фиш ис­поль­зу­ют­ся ли­чин­ки в воз­рас­те че­ты­рех дней. Тес­т­ро­ва­ния про­из­во­дит­ся в 96 лу­ноч­ных план­ше­тах. В каж­дую лун­ку по­ме­ща­ют по од­ной ли­чин­ке “ди­ко­го” ти­па и од­но­му мл рас­т­во­ра изу­ча­е­мо­го со­е­ди­не­ния. Она кон­цен­т­ра­ция тес­ти­ру­ет­ся на 10 эм­б­ри­о­нах.

Подробнее...
НЕСТАНДАРТНЫЕ ПРОЕКТЫ

Мы име­ем боль­шой опыт ра­бо­ты с зеб­ра­фиш в та­ких об­лас­тях, как ге­не­ра­ция ге­не­ти­чес­ки из­ме­нен­ных кло­наль­ных, по­лип­ло­ид­ных и хи­мер­ных рыб, соз­да­ние муль­тит­ран­с­ген­ных ли­ний, изу­че­ние вли­я­ния раз­лич­ных фак­то­ров на про­цесс ре­ге­не­ра­ции хвос­то­во­го плав­ни­ка, сер­д­ца и пе­че­ни, а так­же в об­лас­ти тран­сп­лан­та­ции нор­маль­ных и опу­хо­ле­вых тка­ней...

Подробнее...
ПУБЛИКАЦИИ

ОСНОВНЫЕ ПУБЛИКАЦИИ НА МОДЕЛИ ЗЕБРАФИШ


1  Юрова М.Н., Сафина Д.Р., Мизгирев И.В. Селективное ингибирование   KRAS-сигнального каскада при
   комбинированном воздействии низких доз рапамицина и паклитаксела in vivo. Успехи молекулярной онкологии.
   2018;5(2):42-49

2  Мизгирев И. В.,  Сафина Д. Р.,  Демидюк И. В.,  Костров С. В. Опухолевые модели организменного уровня на основе
    Danio rerio. ACTA NATURAE , 2018, ТОМ 10 № 2 (37), стр. 26-31

3  Biyashev D, Veliceasa D, Topczewski J, Topczewska JM, Mizgirev I, Vinokour E,Reddi AL, Licht JD, Revskoy SY, Volpert OV.
    miR-27b controls venous specification and tipcell fate. Blood. 2012 Mar 15;119(11):2679-87

4  Mizgirev IV, Revskoy S. A new zebrafish model for experimental leukemia therapy. Cancer Biol Ther. 2010 Jun 1;9(11):895-902  

5  Smith AC, Raimondi AR, Salthouse CD, Ignatius MS, Blackburn JS, Mizgirev IV, Storer NY, de Jong JL, Chen AT, Zhou Y,
    Revskoy S, Zon LI, Langenau DM. High-throughput cell transplantation establishes that tumor-initiating cells are abundant in
    zebrafis T-cell acute lymphoblastic leukemia. Blood. 2010 Apr 22;115(16):3296-303

6  Mizgirev I, Revskoy S.Generation of clonal zebrafish lines and transplantable hepatic tumors. Nat Protoc. 2010
    Mar;5(3):383-94   
7  Mizgireuv IV, Revskoy SY. Transplantable tumor lines generated in clonal zebrafish. Cancer Res. 2006 Mar 15;66(6):3120-5

8  Mizgireuv IV, Majorova IG, Gorodinskaya VM, Khudoley VV, Revskoy SY. Carcinogenic effect of N-nitrosodimethylamine on
    diploid and triploid zebrafish (Danio rerio). Toxicol Pathol. 2004 Sep-Oct;32(5):514-8  

     Cancer Biol Ther. 2010 Jun 1;9(11):895-902

About the cover. In the current issue of Cancer Biology & Therapy, Mizgirev and Revskoy report on a new Zebrafish model of ALL and test their model using several drugs currently used to treat human ALL. The cover, taken from their manuscript, shows leukemia cells (expressing GFP, green) homing to the thymus (arrow). To learn more about their model and how it reacted to the chemotherapeutic agents, see the article by Mizgirev and Revskoy.
               Nat Protoc. 2010 Mar;5(3):383-94

About the cover. Mutant (albino) and wild-type zebrafish embryos 48 hours post-fertilization. Image is from the protocol by Mizgirev and Revskoy on p. 383. Cover design by Jamel Wooten.
              Blood. 2012 Mar 15;119(11):2679-87

About the cover.  One fish, two fish, red fish, blue fish: adult transgenic zebrafish (Danio rerio) expressing fluorescent proteins in the muscle are superimposed over GFP-labeled T-cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL) cells from diseased animals. Zebrafish are a powerful genetic model of leukemia and have now been used in conjunction with syngeneic zebrafish lines and high-throughput cell transplantation approaches to show that leukemia-initiating cells are abundant in T-ALL. See the article by Smith et al on page 3296. Artwork and photography by David
                    ACTA NATURAE , 2018:10(2) :26-31

About the cover. image in the cover page (see the article by Mizgirev et al.)
Наши иллюстрации на обложках журналов
КОНТАКТЫ

+7 (981) 195-74-16

info@zebrafish.ru

https://zebrafish.ru

197758, г. Санкт–Петербург, пос. Песочный, ул. Ленинградская, д. 68
Copyright © zebrafish.ru, 2015-2020
Назад к содержимому